聚焦3.15，海能在行動(dòng)——瘦肉精死灰復(fù)燃
1 前言
一年一度的3.15晚會(huì)如期而至，平時(shí)有太多的消費(fèi)隱患藏匿在我們的生活中，每個(gè)人都是一名消費(fèi)者，因此消費(fèi)者權(quán)益晚會(huì)，總會(huì)受到很多人的關(guān)注。
本次晚會(huì)以“提振消費(fèi) 從心開(kāi)始”為主題。其中有關(guān)食品安全“瘦肉精——‘硬羊’背后的秘密”的問(wèn)題被點(diǎn)名，海能技術(shù)對(duì)此食品安全問(wèn)題及時(shí)做出應(yīng)對(duì)，為消費(fèi)者提供全面的檢測(cè)方案，希望可以為大家提供一定的參考。
“一樣的羊不一樣的養(yǎng)”，有的羊可以一只多賣(mài)五六十塊錢(qián)，到底是怎樣做到的呢？
記者在調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)，不少地方的養(yǎng)殖戶(hù)為了利益不惜鋌而走險(xiǎn)，依然在偷偷使用違禁藥物——瘦肉精！
我國(guó)雖然于2000年提出禁止使用“瘦肉精”類(lèi)藥物，但在畜牧業(yè)生產(chǎn)中“瘦肉精”的使用仍屢禁不止。
近年來(lái)，因食用被“瘦肉精”污染的食物導(dǎo)致中毒事件屢有發(fā)生，且后果極其嚴(yán)重，引起了高度重視。
雖然許多國(guó)家都禁止在食源性動(dòng)物的生產(chǎn)中使用鹽酸克倫特羅（瘦肉精）。但記者在現(xiàn)場(chǎng)偷偷帶回的白色粉末以及飼料，在經(jīng)過(guò)瘦肉精快速檢測(cè)條檢測(cè)后，結(jié)果均為陽(yáng)性。
肉類(lèi)中的瘦肉精該如何使用高效液相色譜儀檢測(cè)出來(lái)呢？海能技術(shù)悟空?qǐng)F(tuán)隊(duì)快馬加鞭，為您準(zhǔn)備了一份完整的檢測(cè)方案。
實(shí)驗(yàn)名稱(chēng)：動(dòng)物性食品中克倫特羅的測(cè)定-高效液相色譜法
2 儀器與試劑
2.1儀器
高效液相色譜儀 、水浴超聲清洗器、磨口玻璃離心管、酸度計(jì)、離心機(jī)、振蕩器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、渦旋式混合器、針筒式微孔過(guò)濾膜（0.45μm）、 勻漿器 、N2 -蒸發(fā)器。
2.2試劑
克倫特羅，純度≥99.5%、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、氯化鈉、高氯酸、濃氨水、異丙醇、乙酸乙酯、甲醇：HPLC級(jí)、乙醇、高氯酸溶液（0.1mol/L）、氫氧化鈉溶液（1mol/L）、磷酸二氫鈉緩沖液（0.1mol/L，pH=6.0）、異丙醇+乙酸乙酯（40+60）、乙醇+濃氨水（98+2）、甲醇+水（45+55）。
克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配成濃度為250mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，貯于冰箱中；使用時(shí)用甲醇稀釋成0.5mg/L的克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)使用液，進(jìn)一步用甲醇+水（45+55）適當(dāng)稀釋。
弱陽(yáng)離子交換柱（LC-WCX）（3mL）。
3 實(shí)驗(yàn)方法
3.1提取
3.1.1肌肉、肝臟、腎臟試樣
稱(chēng)取肌肉、肝臟或腎臟試樣10g（精確到0.01g）,用20mL 0.1mol/L高氯酸溶液勻漿，置于磨口玻璃離心管中；然后置于超聲波清洗器中超聲20min，取出置于80℃水浴中加熱30min。取出冷卻后離心（4500r/min）15min。傾出上清液，沉淀用5mL 0.1mol/L高氯酸溶液洗滌，再離心，將兩次的上清液合并。用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9.5±0.1，若有沉淀產(chǎn)生，再離心（4500r/min）10min，將上清液轉(zhuǎn)移至磨口玻璃離心管中，加入8g氯化鈉，混勻，加入25mL異丙醇+乙酸乙酯（40+60），置于振蕩器上振蕩提取20min。提取完畢，放置5min（若有乳化層稍離心一下）。用吸管小心將上層有機(jī)相移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，用20mL異丙醇+乙酸乙酯（40+60）再重復(fù)萃取一次，合并有機(jī)相，于60℃在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至近干。用1mL 0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH6.0）充分溶解殘留物，經(jīng)針筒式微孔過(guò)濾膜過(guò)濾，洗滌三次后完全轉(zhuǎn)移至5mL玻璃離心管中，并用0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH6.0）定容至刻度。
3.1.2尿液試樣
用移液管量取尿液5mL，加入20mL 0.1mol/L高氯酸溶液，超聲20min混勻，置于80℃水浴中加熱30min。以下按3.1.1從“用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9.5±0.1”起開(kāi)始操作。
3.1.3血液試樣
將血液于4500r/min離心，用移液管量取上層血清1mL置于5mL玻璃離心管中，加入2mL 0.1mol/L高氯酸溶液，混勻，置于超聲清洗器中超聲20min，取出置于80℃水浴中加熱30min。取出冷卻后離心（4500r/min）15min。傾出上清液，沉淀用1mL 0.1mol/L高氯酸溶液洗滌，離心（4500r/min）10min，合并上清液，再重復(fù)一遍洗滌步驟，合并上清液。向上清液中加入約1g氯化鈉，加入2mL異丙醇+乙酸乙酯（40+60），在渦旋式混合器上振蕩萃取5min，放置5min（若有乳化層稍離心一下），小心移出有機(jī)相于5mL玻璃離心管中，按以上萃取步驟重復(fù)萃取兩次，合并有機(jī)相。將有機(jī)相在N2-濃縮器上吹干。用1mL 0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH6.0）充分溶解殘留物，經(jīng)筒式微孔過(guò)濾膜過(guò)濾完全轉(zhuǎn)移至5mL玻璃離心管中，并用0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH6.0）定容至刻度。
3.2凈化
依次用10mL乙醇、3mL水、3mL 0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH6.0）、3mL水沖洗弱陽(yáng)離子交換柱，取適量3.1.1、3.1.2、3.1.3的提取液至弱陽(yáng)離子交換柱上，棄去流出液，分別用4mL水和4mL乙醇沖洗柱子，棄去流出液，用6mL乙醇+濃氨水（98+2）沖洗柱子，收集流出液。將流出液在N2-蒸發(fā)器上濃縮至干。
3.3試樣測(cè)定前的準(zhǔn)備
于凈化、吹干的試樣殘?jiān)屑尤?/span>100μL~500μL流動(dòng)相，在渦旋式混合器上充分振搖，使殘?jiān)芙猓后w渾濁時(shí)用0.45μm的針筒式微孔過(guò)濾膜過(guò)濾，上清液待進(jìn)行液相色譜測(cè)定。
3.4色譜參考條件
儀器: 高效液相色譜儀：K2025P2二元高壓輸液泵、K2025AS自動(dòng)進(jìn)樣器、K2025CO柱溫箱、K2025UVD紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器、Wookinglab色譜工作站；
色譜柱：BDS或ODS柱，250mmx4.6mm，5μm；
流動(dòng)相：甲醇+水（45+55）；
流速：1mL/min；
進(jìn)樣量：20μL~50μL；
檢測(cè)波長(zhǎng)：244nm；
柱溫：25℃。
3.5測(cè)試
吸取20μL~50μL標(biāo)準(zhǔn)校正溶液及試樣液注入液相色譜儀，以保留時(shí)間定性，用外標(biāo)法單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)法定量。
參考文獻(xiàn)
[1] GB/T 5009.192-2003 動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定 第二法 高效液相色譜法（HPLC）