液相色譜法檢測飼料中L-肉堿
1 前言
左旋肉堿(L-肉堿)又稱肉毒堿，是一種水溶性氨基酸，由賴氨酸衍生而來。分子結(jié)構(gòu)為L-γ-三甲胺β-羥丁酸，分子式為C7H16NO3，分子量為161.2。它是B族維生素類似物，曾被稱為維生素BT。其分子結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)可供脂肪酸脂化的羥基，其飽和鍵和極性官能團(tuán)有良好的水溶性和吸濕性，200℃以上它仍穩(wěn)定存在，可在PH3-6的溶液中放置一年以上而不變壞。1998年我國衛(wèi)生部將L-肉堿批準(zhǔn)為食品添加劑，列入營養(yǎng)強(qiáng)化劑類。
海能儀器利用全新高性能的Hanon LC7000高效液相色譜儀，經(jīng)實(shí)踐檢測飼料中L-肉堿的含量，得出的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，檢出限好，適用于飼料中L-肉堿的測定，供廣大用戶參考。
2 儀器與試劑
2.1 儀器
Hanon LC7000高效液相色譜儀
Vertex 色譜柱 C18 250mm×4.6mm×5μm
實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備
超聲波水浴
分析天平(感量0.001g)
0.45μm水性濾膜
2.2 試劑
異丙醇，色譜純。
甲醇，色譜純。
乙腈，色譜純。
磷酸氫二鈉。
磷酸二氫鉀。
三乙醇胺。
檸檬酸。
氧化銀。
肉堿衍生劑。
2.3 測定原理
樣品經(jīng)加乙醇超聲提取后，然后加入肉堿衍生劑，將衍生物注入高效液相色譜反相柱上進(jìn)行分離，用紫外檢測器在210nm波長處定量測定。
2.4 試樣溶液的制備
稱取5g試樣于100ml燒杯中，加入30ml無水乙醇，溶解并轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，先后用10ml無水乙醇分3次洗滌燒杯，樣液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，超聲提取10min后用無水乙醇定容至刻度，混勻后于4000r/min離心5min。取上清液2ml，加入肉堿衍生劑0.25ml(衍生劑配制方法：40 mg P-苯酰溴溶解于1.0 ml乙腈，加入40% 氫氧化四丁基銨50 μl)，混合后置于60℃恒溫水溫箱120 min，吸取20 μl進(jìn)樣分析。
2.5 色譜條件
色譜柱：Vertex C18柱 250mm×4.6mm×5μm;
流動(dòng)相：甲醇：磷酸鹽=5:95
流速：1.0mL/min;
溫度：室溫;
進(jìn)樣量：20μL;
檢測波長：210nm。
