索氏提取儀測定靈芝中多糖含量
1 前言
靈芝多糖是靈芝中最有效的成分之一。其有多方面的藥理活性：能提高機體免疫力、加速血液微循環(huán)、提高血液供氧能力、降低機體靜止狀態(tài)下的無效耗氧量等。
本次帶來的實驗方案是水提醇沉淀+苯酚-硫酸光度法。整個實驗水提部分使用SOX406索氏提取儀，含量測定使用紫外可見分光光度計。分光光度法原理：靈芝多糖在酸性環(huán)境下水解為單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，在特定波長下，以比色法測定。
2 實驗部分
2.1 儀器
SOX406索氏提取儀；i8紫外可見光-分光光度計；分析天平；鼓風干燥箱；干燥器；旋風磨；100mL量筒。
2.2試劑
實驗用水應符合GB/T6682中三級用水的規(guī)格，使用試劑除特殊說明外，均為分析純。
硫酸；苯酚；乙醇；葡萄糖；濾紙；脫脂棉。
3實驗方法
3.1儀器準備
請參照說明書，清洗溶劑杯，干燥并稱重記為m0。
3.2樣品制備
將樣品進行粉碎，精確稱取樣品約2.0g左右（記為m），并用雙層濾紙包包好，放入濾紙筒內。
3.3第一階段提取
加入抽提溶劑水60mL，打開冷凝水，啟動脂肪測定儀406。設置第一階段萃取時間2h；萃取溫度140℃；實驗結束完，將萃取液收集到燒杯內，并用少量蒸餾水由上端萃取口分多次淋洗樣品，并入到燒杯內，溶劑杯內換入新的蒸餾水再次進行萃取。再重復此操作兩次。
3.4濃縮
將燒杯置于帶有石棉網的電爐上烘干至少量水時，在進行水浴烘干。
3.5醇沉淀
將殘渣用5ml水溶解，邊攪拌邊緩慢地加乙醇75ml，搖勻，在低溫環(huán)境下靜置12小時，離心，棄去上層清液，沉淀物用熱水溶解并轉移至50ml容量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻。
3.6苯酚溶液配制
稱取10.0g苯酚置于200ml容量瓶中，加水定容，置于棕色瓶中，避光保存。
3.7葡萄糖溶液配制
稱取葡萄糖0.1g溶于100ml容量瓶中，并定容。取其中10ml溶液于100ml容量瓶中，并定容，搖勻得0.1mg/ml溶液。
3.8.標準曲線建立
取5個10ml容量瓶，向其中加入0.0,0.2,0.4,0.6,0.8ml葡萄糖溶液，依次加水1ml，苯酚1ml，濃硫酸5ml，振搖5min，置于40℃水浴15min，放冷定容至10ml，用紫外-可見分光光度法在490nm波長處測定其吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
3.9樣品測試
取樣品0.5ml，按9中步驟進行依次加入各種試劑，進行測定。從標準曲線上，讀出其濃度C(μg/ml)。
4結果分析
根據藥典規(guī)定，靈芝以無水葡萄糖計，可根據如下公式進行計算，
標準曲線 C=-1.556+119.1×A
注意事項
該實驗每階段收集時，建議多次淋洗。在萃取過程中，將樣品浸入到萃取液中，可加速萃取速度。