全自動機械臂固相萃取儀－高效液相色譜法檢測豬肉中13種磺胺類藥物殘留量

1 前言

近年來，越來越多的研究結果表明，磺胺類藥物特別是磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲基異惡唑等殘留對人體的危害主要表現(xiàn)為“致癌、致畸、致突變”作用，引起過敏、中毒和導致耐藥性菌株產生，以及引起造血系統(tǒng)障礙、急性溶血性貧血、粒細胞缺乏癥、再生障礙性貧血等。加強磺胺殘留的檢測及監(jiān)控是控制獸藥殘留發(fā)生的重要措施之一。采用海能全自動固相萃取儀-高效液相色譜法進行檢測動物源性食品中磺胺類藥物殘留，有效的縮短樣品中目標物的固相凈化所需要的時間，提高了工作效率，也節(jié)約了人力；且能精準的控制上樣、淋洗、洗脫等溶劑流速，提高了樣品目標物的回收率。

2 儀器與試劑

2.1 儀器

SPE400全自動機械臂固相萃取儀；HN200多功能氮吹儀；高效液相色譜儀；絞肉機；粉碎機；分析天平；離心機；其他常規(guī)玻璃儀器；濾膜（有機相，0.22μm）。

SPE 400 全自動機械臂固相萃取儀

2.2試劑及耗材

實驗用水應符合GB/T6682中三級用水的規(guī)格，使用試劑除特殊說明外，均為分析純。

乙酸乙酯（色譜純）；乙腈（色譜純）；甲醇（色譜純）；鹽酸、正己烷、甲酸（色譜純）、氨水。

MCX柱：60mg/3ml，或者相當。

0.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水溶解并稀釋至1000mL。

0.1%甲酸乙腈溶液：取0.1%甲酸830mL，用乙腈溶解并稀釋至1000mL。

洗脫液：取氨水5mL,用甲醇溶解并稀釋至100mL。

0.1mol/L鹽酸溶液：取鹽酸0.83mL，用水溶解并稀釋至100mL。

50%甲醇乙腈溶液：取甲醇50mL，用乙腈溶解并稀釋至100mL。

3實驗方法

3.1取樣

取適量新鮮或解凍的供試組織，采用絞碎機絞碎，并用粉碎機將其粉碎均質。

3.2提取

精確稱取均質好的試料5g于聚四氟乙烯離心管中，加入乙酸乙酯20mL，搖動5min，將試樣分散開，在2000r/min下離心10min，取上層清液與100mL容量瓶中；殘渣中再加入20mL乙酸乙酯，重復抽提一次，合并兩次提取液于容量瓶中。

3.3脫脂

在容量瓶中加0.1mol/L鹽酸溶液4mL，于40℃下氮吹濃縮至少3mL，轉入10ml離心管中，用0.1mol/L鹽酸溶液2mL洗容量瓶。并轉至同一試管中。再用正己烷3mL洗容量瓶，將正己烷轉至同一離心管中，晃動離心管將其混合均勻，在2000r/min下離心10min，棄去正己烷。再次用正己烷3mL洗容量瓶，轉至同一離心管中，搖晃離心管將樣品在溶劑中混合均勻，在2000r/min下離心10min，棄去正己烷。取下層液備用。

3.4固相萃取小柱凈化（MCX柱）

表1 固相凈化條件

濃縮、轉化溶劑：收集洗脫液，于40℃氮氣吹干；加入0.1%甲酸乙腈溶液1.0ml溶解殘余物，濾膜過濾，供高效液相色譜測定。

3.5色譜測定條件

色譜柱：C18；

流動相：0.1%甲酸+乙腈，梯度如下表；

流速：1mL/min；

柱溫：30℃；

檢測波長：270nm；

進樣體積：100μL。

表2 梯度表

3.6 標準曲線繪制

精密將磺胺類藥物標準品稀釋成濃度為10、50、100、250、500、2500和5000μg/L系列混合標準溶液，供液相色譜使用。以測得的峰面積為縱坐標，以對應的標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線，求回歸方程和相關系數(shù)。

3.7測定

將樣品按照與標準曲線繪制時相同的色譜條件進行測試，得到樣品色譜峰的峰面積，根據(jù)所得的標準曲線，求出樣品中磺胺類藥物的濃度。

4結果計算

試樣中磺胺類藥物殘留量計算：

其中：X——試樣中相應的磺胺類藥物的殘留量，單位微克每千克（μg/kg）；

C——試樣中相應的磺胺類藥物濃度，單位微克每毫升（μg/mL）；

V——溶解殘余物所用0.1%甲酸乙腈溶液體積，單位毫升（mL）；

m——供試樣品質量，單位為克（g）；

參考文獻

[1] GB 29694-2013食品安全國家標準動物性食品中13種磺胺類藥物多殘留的測定高效液相色譜法[S].