全自動(dòng)機(jī)械臂固相萃取儀－高效液相色譜法 檢測牛奶中阿維菌素殘留量
1 前言
目前，阿維菌素作為牛常用的抗寄生蟲藥物，容易造成牛組織中藥物殘留超標(biāo)，且會(huì)污染牛奶。因此，監(jiān)控該類有無在畜禽類可食性組織及產(chǎn)品中的殘留顯得非常重要。采用海能全自動(dòng)固相萃取儀-高效液相色譜法進(jìn)行檢測牛奶中阿維菌素農(nóng)藥殘留，有效的縮短樣品中目標(biāo)物的固相凈化所需要的時(shí)間，提高了工作效率，也節(jié)約了人力；且能精準(zhǔn)的控制上樣、淋洗、洗脫等溶劑流速，提高了樣品目標(biāo)物的回收率。
2 儀器與試劑
2.1儀器
SPE400全自動(dòng)機(jī)械臂固相萃取儀；HN200多功能氮吹儀；高效液相色譜儀（配熒光檢測器）；分析天平；高速分散均質(zhì)機(jī)；渦動(dòng)混合儀；離心機(jī)；其他常規(guī)玻璃儀器；濾膜（有機(jī)相，0.45μm）。
SPE400全自動(dòng)機(jī)械臂固相萃取儀
2.2試劑及耗材
實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682中一級(jí)用水的規(guī)格，使用試劑除特殊說明外，均為分析純。
乙腈（色譜純）；甲醇（色譜純）；三氟乙酸酐；三乙胺；異辛烷；N-甲基咪唑；阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品：含量≥98%。
固相萃取柱：C18，500mg/6ml。
衍生化試劑A液：取N-甲基咪唑1mL、乙腈1mL，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。
衍生化試劑B液：取三氟乙酸酐1mL、乙腈2mL，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。
洗滌液：取乙腈30mL、水70mL和三乙胺20μL，混勻。
3 實(shí)驗(yàn)方法
3.1取樣
取適量新鮮的牛奶，用高速分散均質(zhì)機(jī)將樣品混合均勻。
3.2提取
稱取樣品5g于50mL離心管中，加乙腈8mL，渦動(dòng)1min，4500r/min離心10min，取上清液。殘?jiān)屑右译?/span>8mL，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，加水20mL、三乙胺50μL，混勻，備用。
3.3固相萃取柱凈化（C18柱）
表1 固相凈化條件
3.4濃縮及衍生化
用氮吹儀吹至近干，備用。于備用管中依次加入衍生化試劑A液100μL、衍生試劑B液150μL，密閉，渦動(dòng)10s，依次加冰醋酸50μL和三乙胺各50μL，渦動(dòng)10s，于室溫密閉反應(yīng)30min，加甲醇650μL混勻。過濾，供高效液相色譜法測定。
3.5色譜測定條件
色譜柱：C18，粒徑5μm，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm；
流速：1.0mL/min；
激發(fā)波長：365nm； 發(fā)射波長：475nm；
柱溫：30℃；
進(jìn)樣體積：20μL。
流動(dòng)相：乙腈：水=（90+10，V/V），
3.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
精密量取10μg/mL阿維菌素類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用乙腈稀釋，配制成濃度為2、5、10、50、1000ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取1.0mL于5mL試管中，于60℃水浴氮?dú)獯蹈桑来渭尤胙苌噭?/span>A液100μL、衍生試劑B液150μL，密閉，渦動(dòng)10s，依次加冰醋酸50μL和三乙胺各50μL，渦動(dòng)10s，于室溫密閉反應(yīng)30min，加甲醇650μL混勻，供高效液相色譜測定。以測得峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求出回歸方程和相關(guān)系數(shù)。
3.7測定
取試樣及不添加樣品的空白溶液，按外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算，根據(jù)回歸方程，得出試樣中阿維菌素含量。
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
4.1結(jié)果
4.2結(jié)論
采用SPE400全自動(dòng)機(jī)械臂固相萃取儀可以快速對(duì)樣品提取液進(jìn)行凈化和富集，可做到無人看守、批量處理，省去實(shí)驗(yàn)員繁瑣的加液取液等人工操作，方便快捷。采用SPE400全自動(dòng)機(jī)械臂固相萃取儀對(duì)樣品提取液可以精準(zhǔn)的控制進(jìn)樣、加液等流速，有利于固相小柱進(jìn)行萃取分離，從而實(shí)現(xiàn)較好的樣品檢測重復(fù)性。
參考文獻(xiàn)
[1] GB 29696-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 牛奶中阿維菌素類藥物多殘留的測定[S].