凱氏定氮法測(cè)定飼料中真蛋白的含量
1 前言
飼料作為畜牧養(yǎng)殖生產(chǎn)中的重要生產(chǎn)資料，其營養(yǎng)價(jià)值的高低直接影響到畜牧養(yǎng)殖的效益，而飼料中蛋白質(zhì)的含量是一項(xiàng)重要的指標(biāo)，飼料中粗蛋白質(zhì)包括真蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)兩部分含氮物質(zhì)，后者主要包括游離氨基酸、硝酸鹽、銨鹽等，故不能反映出飼料蛋白質(zhì)對(duì)動(dòng)物的真正營養(yǎng)價(jià)值。有些不法生產(chǎn)商故意添加硫酸銨、尿素等非蛋白質(zhì)來提高產(chǎn)品的粗蛋白含量，導(dǎo)致部分養(yǎng)殖場(chǎng)戶存在一個(gè)誤區(qū)，認(rèn)為標(biāo)簽上標(biāo)注的粗蛋白質(zhì)高，營養(yǎng)價(jià)值就高，從而造成養(yǎng)殖效益的低下。本文在凱氏定氮方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行相應(yīng)的前處理從而達(dá)到測(cè)定真蛋白的目的。
蛋白質(zhì)經(jīng)沸水提取并在一定堿性條件下，能與硫酸銅發(fā)生鹽析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于熱水，而非蛋白氮?jiǎng)t易溶于水，用熱水洗沉淀，將水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀物再用凱氏定氮法測(cè)定，得出真蛋白質(zhì)的含量。
2 實(shí)驗(yàn)部分
2.1 儀器與試劑
粉碎機(jī)、40目分樣篩、分析天平(感量0.1mg)、燒杯250ml、玻璃棒、漏斗(直徑10cm)、定性濾紙(中速，12.5cm，15cm)、可控溫干燥箱、Hanon K1100F全自動(dòng)凱氏定氮儀、Hanon SH420F石墨消解爐、可控溫電爐
濃硫酸(98%)、硫酸銅(分析純)、硫酸銅溶液(10%)、硫酸鉀、氫氧化鈉溶液(40%)、氫氧化鈉溶液(2.5%)、硼酸(20g/L，按混合指示劑：硼酸=1:100加入指示劑)、甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑(1:5)、硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(C(1/2H2SO4=0.1011mol/L)、氯化鋇溶液(5%)
2.2 實(shí)驗(yàn)過程
2.2.1前處理
將風(fēng)干飼料樣品用飼料樣品粉碎機(jī)粉碎，通過40目(孔徑0.45 mm)篩，制得分析飼料樣本，備用。
準(zhǔn)確稱取約0.5g試樣(精確至0.000 1 g)置于250 mL燒杯中，加75mL蒸餾水，加熱至沸。，煮沸30min，加入2.5 %氫氧化鈉溶液20 mL，10 %硫酸銅溶液20 mL，用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈鶆颍⒎幸欢螘r(shí)間，冷卻放置超過2 h。用定性濾紙過濾，然后用70~80 ℃熱水沖洗沉淀5次以上，用 5%氯化鋇溶液5滴和數(shù)滴鹽酸檢查濾液，直至不生成白色硫酸鋇沉淀。將沉淀和
濾紙放在65 ℃烘箱烘干。(共稱取9個(gè)樣品，4-9經(jīng)上述沉淀處理，8號(hào)樣品添加0.0636g尿素，9號(hào)樣品添加0.1135g硫酸銨;1-3號(hào)樣品不做沉淀處理直接消化)
2.2.2 消化
將干燥后的沉淀連同濾紙一起放入消化管中，加入15mL濃硫酸，3g硫酸鉀，0.2g硫酸銅，放在石墨消解爐上設(shè)置溫度梯度升溫消化(同時(shí)做空白試驗(yàn))。
升溫程序：
階段溫度℃時(shí)間 min
120030
232030
340090
消解完成后，冷卻，待上機(jī)。
2.2.3 測(cè)試
將冷卻后的消化管置于K1100F全自動(dòng)凱氏定氮儀上，設(shè)置參數(shù)：硼酸20mL，堿 60mL，稀釋水10mL，蒸餾5min。依次做空白及樣品，結(jié)果自動(dòng)計(jì)算，打印。
3 結(jié)果與討論
3.1 樣品空白消耗滴定酸的體積
4號(hào)樣品測(cè)得結(jié)果偏低，可能是在過濾的過程中造成損失，因此平均值計(jì)算時(shí)將其舍去，通過3.2與3.3的數(shù)據(jù)對(duì)比可以看出兩者相差近2%，除去操作損失基本可以判斷飼料中確實(shí)含有非蛋白氮成分。8號(hào)和9號(hào)樣品分別添加一定量的尿素、硫酸銨，但是真蛋白含量與其他樣相差不大，所以可以驗(yàn)證此方法測(cè)定飼料中真蛋白的可行性。
3.4 結(jié)論
通過硫酸銅等重金屬鹽在堿性環(huán)境下是蛋白質(zhì)變性，過濾掉非蛋白氮成分，再利用凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，操作并不復(fù)雜，且結(jié)果令人滿意，通過添加非蛋白氮(尿素、硫酸銨)成分驗(yàn)證了此方法的適用性，可以用于實(shí)際的真蛋白檢測(cè)中。
3.5 注意事項(xiàng)
3.5.1 傾瀉法過濾洗滌時(shí)，燒杯中的沉淀物一定要徹底清洗。且洗滌時(shí)要用80℃左右的熱水，可以減少洗滌次數(shù)。
3.5.2 沉淀必須要烘干，不可帶有大量水分放入消化管消化，否則會(huì)過沖，造成實(shí)驗(yàn)失敗。
3.5.3 在石墨爐上消化時(shí)，應(yīng)設(shè)置梯度升溫，避免樣品直接高溫出現(xiàn)過沖現(xiàn)象。
參考文獻(xiàn)(無)