聚焦3.15：養(yǎng)殖海參中抗生素殘留的測定方法
今年的3.15晚會“遲到”了，但沒有缺席。昨晚，推遲了4個月的3.15晚會終于來了，精裝修房施工質(zhì)量難保證、“漢堡王”使用過期食材、“趣頭條”推送非法廣告、養(yǎng)殖海參敵敵畏成箱放……今年被點名的又不少。
不看不知道，原來海參養(yǎng)殖水這么深，此次3.15晚會主要曝出了有關(guān)海參養(yǎng)殖的5大“黑幕”：
● 大量使用敵敵畏清池
● 排回大海污染環(huán)境
● 使用抗生素獸藥原粉防病
● 南方參冒充北方參
● 麥芽糊精腌泡增重
看上去全產(chǎn)業(yè)鏈沒有一處能讓人放心。這些行為不但嚴(yán)重違反了相關(guān)法規(guī)，還給環(huán)境造成了極大的危害。
記者了解到，大棚養(yǎng)殖海參在換水的時候，容易誘發(fā)疾病，這時就需要使用一些抗生素來預(yù)防。一位獸藥店經(jīng)營者告訴記者：“拌抗生素，都偷著用，有查的，污染水質(zhì)。”
由于獸藥原粉濃度高，使用時容易引發(fā)毒副作用，以及食品安全問題。我國獸藥管理條例明確規(guī)定：禁止將獸用原料藥拆零銷售或者銷售給獸藥生產(chǎn)企業(yè)以外的單位和個人。
我國水產(chǎn)養(yǎng)殖濫用抗生素現(xiàn)狀令人憂心，不僅對水質(zhì)造成污染，同時水產(chǎn)品中抗生素殘留嚴(yán)重，人長期攝入含抗生素殘留的水產(chǎn)品后，藥物不斷在體內(nèi)蓄積，當(dāng)濃度達到一定量后，就會對人體產(chǎn)生毒性作用。
土霉素、四環(huán)素和金霉素均屬于四環(huán)素類抗生素，四環(huán)素類藥物的毒性反應(yīng)主要表現(xiàn)為對胃、腸、肝臟的損害及牙齒的染色等。還會造成過敏反應(yīng)，二重感染，致畸胎作用。
為了保障人民的身體健康，利于政府對食品安全的監(jiān)管，我國于2002年提出了水產(chǎn)品中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留的測定方法：SC/T 3015-2002 水產(chǎn)品中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留的測定。
儀器與試劑
1、儀器
高效液相色譜儀、分析天平、均質(zhì)器、預(yù)處理柱：ODS C18、離心機：4000r/min、負(fù)壓抽濾器。
2、試劑
乙腈：色譜級。
0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液：稱取1.56g（稱準(zhǔn)至0.01g）分析純磷酸二氫鈉溶于蒸餾水中，定容至1000mL，以磷酸調(diào)pH至2.5，經(jīng)微孔濾膜（0.45μm）過濾后備用。
土霉素、四環(huán)素、金霉素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取土霉素0.01g（稱準(zhǔn)至0.0001g）、四環(huán)素0.01g（稱準(zhǔn)至0.0001g），金霉素0.02g（稱準(zhǔn)至0.0001g），溶于0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液中，定容至100mL，此溶液每毫升含土霉素100μg，四環(huán)素100μg，金霉素200μg。
以上標(biāo)準(zhǔn)品均按1000IU/mg 計算，本溶液于0℃~4℃時保存，可使用一周。
土霉素、四環(huán)素、金霉素、混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：移取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0mL，定容至100.0mL，得土霉素、四環(huán)素濃度為10μg/mL，金霉素濃度為20μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。
以上述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制土霉素、四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)使用濃度系列： 0.05、0.10、0.20、0.25、0.50、1.0μg/mL; 以上述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制金霉素標(biāo)準(zhǔn)使用濃度系列： 0.10、0.20、0.40、0.50、1.0、2.0μg/mL。此標(biāo)準(zhǔn)使用液使用時現(xiàn)配。
0.5% 或1%高氯酸溶液。
甲醇：分析純。
5%乙二胺四乙酸二鈉溶液：取5g 分析純乙二胺四乙酸二胺（EDTA-2Na）溶解定容至100mL。
正已烷：分析純。
氮氣：純度大于99%。
實驗方法
1、取樣
稱取5.000g± 0.001g樣品，置于50mL離心管中，加入0.5%高氯酸溶液10mL(水溶液蛋白含量高的樣品，用1%高氯酸溶液)，用均質(zhì)器均質(zhì)30s，于振蕩器上振蕩提取3min，以4000r/min 離心10min，取上清液于50mL試管中，向離心管中的殘渣再加入0.5%高氯酸溶液5mL，重復(fù)操作一次，合并上清液。加入1mL正己烷，振蕩1min后，離心，除去正己烷相；再加入1mL正己烷，振蕩1min后，離心，除去正己烷相。水相用ODS-C18柱（預(yù)先用5mL甲醛、2mL5%乙二胺四乙酸二鈉溶液、5mL實驗用水洗過）預(yù)處理，用10mL蒸餾水洗去雜質(zhì)，以5mL甲醛洗脫，收集洗脫液，40℃水域中氮氣吹干，以甲醛定容至1.0mL，以0.45μm濾膜過濾，濾液備用。
2、色譜參考條件
儀器: 高效液相色譜儀：K2025 P2二元高壓輸液泵、K2025 AS自動進樣器、K2025 CO柱溫箱、K2025 UVD紫外-可見光檢測器；
色譜柱：ODS-C18，長250mm，內(nèi)徑4mm，粒度5.0μm；
流動相：乙腈：0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液（26：74）；
流速：1.0mL/min；
進樣量：30μL；
檢測波長：355nm；
柱溫：37℃。
3、測試
分別取30μL標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，以峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)樣品含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。取試樣溶液30μL，在高效液相色譜儀上測定峰面積，從工作曲線計算濾液中土霉素、四環(huán)素、金霉素的含量。
悟空K2025高效液相色譜儀
可靠
強化可靠性設(shè)計理念，采用全球高品質(zhì)核心元器件，歷經(jīng)權(quán)威機構(gòu)可靠性驗證，確保系統(tǒng)長期穩(wěn)定運行；
精準(zhǔn)
獨特的送液與進樣技術(shù)，結(jié)合高靈敏度檢測器與強大的數(shù)據(jù)處理軟件，確保分析結(jié)果精密準(zhǔn)確；
友好
簡潔易用的Wookinglab界面，結(jié)合多項人性化的細節(jié)設(shè)計，使儀器的操控更加便捷高效；
合規(guī)
Wookinglab采用數(shù)據(jù)庫存儲模式，支持多級權(quán)限管理，具備完善的審計追蹤功能，充分滿足FDA 21 CFR Part 11要求。