分光光度法檢測蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留
前言
在蔬菜生長過程中，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對蔬菜上的多種害蟲均有較好的防效作用。但是，殘留在蔬菜或水果中的農(nóng)藥進(jìn)入到有機(jī)體內(nèi)具有積累效果，會(huì)對生物體內(nèi)膽堿酯酶具有抑制作用，使其失去分解乙酰膽堿的能力，造成乙酰膽堿積累，引起神經(jīng)功能紊亂，從而導(dǎo)致肌體的損害。
現(xiàn)在比較成熟的理化檢測方法一般步驟復(fù)雜，所用時(shí)間長，且儀器昂貴，分光光度儀通過農(nóng)藥對酶的抑制可檢測出農(nóng)藥殘留是否在合格范圍內(nèi)，具有簡單、快速、成本低等特點(diǎn)。
實(shí)驗(yàn)部分
1.1 測定原理
在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對乙酰膽堿酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)，正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（乙酰膽堿）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在412nm處測定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷和氨基甲酸脂類農(nóng)藥存在。
1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
Hanon i2可見分光光度計(jì)，天平。
1.3 溶液配制
1.3.1 pH8.0緩沖溶液：分別取11.9g無水磷酸氫二鉀與3.2g磷酸二氫鉀，用1000ml蒸餾水溶解。
1.3.2顯色劑：:分別取160mg硫代乙酰膽堿，加3.0ml蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩１４嫫诓怀^兩周。
1.3.3底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿，加3.0ml蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩１４嫫诓怀^兩周。
1.3.4乙酰膽堿酯酶：根據(jù)酶的活性情況，用緩沖溶劑溶解，3min的吸光度變化值ΔA0值應(yīng)控制在0.3以上。搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫４嫫诓怀^四天。
可選用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的ΔA0值應(yīng)控制在0.3以上。
1.4 實(shí)驗(yàn)過程
儀器準(zhǔn)備，請參照說明書。
1.4.1樣品前處理：
選取有標(biāo)準(zhǔn)性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取樣品1g，放入燒杯或提取瓶中，加入5ml緩沖溶液，振蕩1min~2min，倒出提取液，靜置3min~5min,待用。
1.4.2對照溶液測試：
先于試管中加入2.5ml緩沖溶液，再加入0.15ml酶液、0.1ml顯色劑，搖勻后于37℃左右的溫度放置15min以上（每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致）。加入0.1ml底物搖勻，此時(shí)檢液開始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值ΔA0。
1.4.3樣品溶液測試:
先于試管中加入2.5ml樣品提取液，其他操作與對照溶液測試相同，記錄反應(yīng)結(jié)果。
結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。
當(dāng)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸脂類農(nóng)藥存在，樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢測2次以上。
對陽性結(jié)果的樣品，可使用其他方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。
1.6 參考文獻(xiàn)
GB/T 5009.199 蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測。