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ALC10黃曲霉毒素液相色譜分析儀測(cè)定花生中黃曲霉毒素含量

1 前言

花生是重要的油用、食用型經(jīng)濟(jì)作物,含有豐富的脂肪、蛋白質(zhì)和維生素,具有很高的食用價(jià)值。我國是最大的花生生產(chǎn)國,花生產(chǎn)量約占世界的五分之二。但是花生種植、收獲及儲(chǔ)藏過程中易受真菌侵染產(chǎn)生強(qiáng)致癌物質(zhì)——黃曲霉毒素(Aflatoxin, AFT),嚴(yán)重威脅食品安全。并且花生黃曲霉毒素超標(biāo)事件時(shí)有發(fā)生,已成為我國農(nóng)產(chǎn)品出口的障礙。

2 儀器與試劑

2.1儀器

ALC10黃曲霉毒素液相色譜分析儀；高速粉碎機(jī)；超聲波；天平；離心機(jī)；固相萃取裝置(帶真空泵)；免疫親和柱；氮吹儀。

2.2試劑與材料

磷酸鹽緩沖溶液（PBS）；

1%TritonX-100；

甲醇：色譜純 ；

乙腈：色譜純；

黃曲霉毒素AFT G2，G1，B2，B1混合標(biāo)準(zhǔn)品：sigma；

樣品：花生。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1樣品制備

樣品粉碎：取花生樣品1kg，用高速粉碎機(jī)將其粉碎，過2mm孔徑試驗(yàn)篩，混合均勻后縮分至100g，儲(chǔ)存于樣品瓶中，密封保存。

樣品提取：稱取5g上述試樣于50mL離心管中，加入20.0mL乙腈-水溶液(84+16)，渦旋混勻，置于超聲波中振蕩20min，在6000r/min下離心10min，取上清液。

樣品凈化：準(zhǔn)確移取4mL上述上清液，加入46mL1% TritonX-100的PBS，混勻。

免疫親和柱內(nèi)的液體放棄后，將上述樣液移至50mL注射器筒中，調(diào)節(jié)下滴速度，控制樣液以1mL/min~3mL/min的速度穩(wěn)定下滴。待樣液滴完后，往注射器筒內(nèi)加入2×10mL水，以穩(wěn)定流速淋洗免疫親和柱。待水滴完后，用真空泵抽干親和柱。脫離真空系統(tǒng)，在親和柱下部放置10mL刻度試管，取下50mL的注射器筒，2×1mL甲醇洗脫親和柱，控制1mL/min~3mL/min的速度下滴，再用真空泵抽干親和柱，收集全部洗脫液至試管中。在50℃下用氮?dú)饩従彽貙⑾疵撘捍抵两桑?span>用初始流動(dòng)相定容至1.0mL，渦旋30s溶解殘留物，0.22μm濾膜過濾，收集濾液于進(jìn)樣瓶中以備進(jìn)樣。

3.2標(biāo)準(zhǔn)品制備

取標(biāo)準(zhǔn)品用流動(dòng)相稀釋成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液工作液。(含AFT B1 和AFT G1濃度為 0.1ng/mL、0.5ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、40.0ng/mL，AFT B2 和 AFTG2濃度為0.03ng/mL、0.15ng/mL、0.6ng/mL、1.5ng/mL、3.0ng/mL、6.0ng/mL、12ng/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液)。

3.3儀器方法

a) 流動(dòng)相:A相，水；B相，乙腈-甲醇(50+50)；

b) 等梯度洗脫條件：A，68%；B，32%；

c) 色譜柱：C18柱(柱長150mm，柱內(nèi)徑4.6mm，填料粒徑5μm)；

d) 流速：1.0mL/min；

e) 柱溫：40 ℃；

f) 進(jìn)樣量：50μL；

g) 激發(fā)波長：360nm；發(fā)射波長：440nm。

4 測(cè)試結(jié)果

4.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.2結(jié)論

使用ALC10黃曲霉毒素液相色譜分析儀測(cè)定花生中黃曲霉毒素G2，G1，B2，B1線性良好。黃曲霉毒素G2，G1，B2，B1的檢出限均符合國標(biāo)要求。

參考文獻(xiàn)

[1] GB 5009.22-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定

[2] GB 2761-2017 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量